USO DE TRICHODEX EN CHILE PARA EL CONTROL DE Botrytis cinerea EN UVA DE MESA

---

Ing. Agr. Msc. Marcela Esterio G.
Ing. Agr. Ph. D. Jaime Auger S.
Departamento de Sanidad Vegetal, Facultad Ciencias Agronómicas
Universidad de Chile
mesterio@uchile.cl

Cita: Uso de trichodex en Chile para el control de Botrytis cinerea en uva de mesa. Esterio, Marcela y Auger, Jaime. Santiago, Chile, Facultad de Ciencias Agronómicas, Universidad de Chile, 2005. :. http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_agronomicas/montealegre_j/4.html

 

1. Introducción

El género Trichoderma es un ejemplo de antagonista biológico  y ejerce su acción mediante varios mecanismos entre los que juegan un rol importante el parasitismo (enzimas extracelulares tales como quitinasas, celulasas, Beta-1-3-glucanasas y proteasas que destruyen paredes de hifas, conidios o esclerocios de varios hongos fitopatógenos), y el efecto

la competencia por sustrato y nutrientes liberados por la planta.

2. Trichodex 25% WP

Actualmente Trichodex 25% WP, fungicida biológico en base a Trichoderma harzianum R. aislado T₃₉,  no se produce a nivel mundial. No obstante este hecho,  en este artículo se presentan algunos de los aspectos que involucraron el desarrollo de este fungicida para el control de la “Pudrición Gris” en uva de mesa en Chile y sus limitaciones de uso, con el fin de que las experiencias realizadas puedan servir de base para la introducción de futuras alternativas biológicas de control de esta importante enfermedad que afecta a la vid.

El uso de Trichodex 25% WP, para el control de botritis en uva de mesa fue considerado en la década del 90, como una interesante alternativa a ser evaluada  debido particularmente a tres apectos fundamentales para la época:

a)      Escasez de Botriticidas efectivos y con registro en mercados de destino de uva de exportación.

En ese momento se contaba con un número reducido de fungicidas para el control de Botrytis cinerea, (Captan, Dicarboximidas y DF-100). De los fungicidas mencionados, Captan ya estaba siendo restringido en su uso para los principales mercados de destino de la uva de exportación; en relación a las dicarboximidas, Iprodione era el único de esta familia de fungicidas que permanecía en el mercado y  se habían comenzado a detectar niveles de resistencia a este por  un uso repetitivo frente a la escasez de botriticidas eficientes en el mercado, y el último de estos (DF-100),  aunque presentaba una menor eficacia que las dicarboximidas, por su modo de acción de amplio espectro permitía disminuir o atenuar el efecto de los aislados de botrytis resistentes a este grupo.   Las nuevas moléculas altamente efectivas para el control de botritis como Vangard (Cyprodinil), Switch (Cyprodinil & Fludioxanil), Horizon (Tebuconazole), Stroby (Krexoxim–Methyl), Teldor (Fenhexamid), Flint (Trifloxystrobin), Tie-Break  (Fenhexamid & Tebuconazole), y Scala (Pyrimethanil), se encontraban en la etapa de introducción.

b)       Fenómenos de Resistencia  a Fungicidas más efectivos de ese entonces

Resistencia amplia  y generalizada a benzimidazoles e inicio de desarrollo de resistencia a dicarboximidas.

c)       Producción natural

Se comienza a sentir en el medio la exigencia de los mercados respecto de una producción más limpia “Producción sana” y que interfiriera en la menor forma posible con el medio ambiente “menor contaminación”.

Con todo lo antes mencionado nace  la necesidad de incorporar nuevos productos de origen biológico, y dentro de este marco TRICHODEX, fungicida biológico desarrollado en Israel por Makhteshim-Agan / representado en Chile por Magan Chile Ltda., iniciativa que posteriormente cuenta también con el apoyo de Abbott Laboratories de Chile Ltda. y AgrEvo de Chile S.A., se presentaba como una interesantealternativa a evaluarse para el control de botritis en uva de mesa.

El producto en sí corresponde al aislado MTR₃₉ de la especie Trichoderma harzianum Rifai, sometida a procesos de fermentación, y cuyo ingrediente activo son esporas del hongo.

La primera incógnita a resolver para introducir este fungicida biológico en el mercado Chileno era determinar la eficacia de la formulación y la dosis que resultara ser la más efectiva para el control de botritis. Una segunda pregunta a resolver era determinar la época y momento de aplicación en que el producto otorgara una mayor protección, considerándose importante para ello el evaluar el efecto residual del producto formulado,  y finalmente establecer tanto in vitro como in vivo la  compatibilidad del producto biológico con los fungicidas de uso habitual en ese entonces en programas fitosanitarios en vides.

2.1 Eficacia de Trichodex en el control de Botrytis cinerea en uva de mesa

Es importante señalar que una de las primeras limitantes que se detectó en las formulaciones de Trichodex estudiadas, particularmente durante los primeros años de estudio, correspondió a la viabilidad de los propágulos que presentaban las formulaciones, la que era muy variable, y que pudo comprobarse mediante siembras de diluciones de la formulación sobre placas de Petri conteniendo medio APD (Agar-Papa-Dextrosa), y que indicaba problemas de homogeneidad del producto formulado.

Posteriormente, en ensayos efectuados durante 3 temporadas sucesivas se estableció que el fungicida biológico presentaba acción sobre B. cinerea, y que la dosis mínima a utilizar correspondía a 3 Kg /ha. El Efecto de control obtenido por este fungicida era similar al obtenido por programas de uso habitual en la década del 90 para el control de la enfermedad. Además se pudo determinar que al igual que DF-100, Trichodex permitía disminuir el nivel de contaminación de botritis en el parronal y los niveles de resistencia a benzimidazoles y dicarboximidas en las cepas sobrevivientes (Cuadro 1). 

Cuadro 1.  Efecto de Trichodex 25% WP y de BC-1000 sobre B. cinerea en cv. Thompson Seedless, localidad de Buin, temporada 1994/95: Niveles de pudrición final de B. cinerea obtenidos en tratamientos tradicionales de control en precosecha (T1 y T2), versus tratamiento biológico  puro en base a Trichodex 25% WP (T3) y orgánico puro en base a DF-100 (BC-1000), después de 35 días a 0ºC y 2 días a temperatura ambiente (15 -18ºC.); Nivel de inóculo y  niveles de resistencia finales a dicarboximidas (vinclozolin) (%RDv),  y a Benzimidazoles (Benomyl) (%RBb), en aislados recuperados a partir de esclerocios desde las parcelas tratadas durante el periodo de receso.

	%Pudrición Tratam.  Postcosecha**		Nº esclerocios/ pecíolo	50ppm vinclozolin %RDv	20ppm Benomilo %RBb
	A	B
T1:V1/(B+C)2/C3/C4/ I5	3,29a**	33,56a	5,5b	49,4a	38,8a
T2: T( 1;2;3;4; y 5)	0b	12,4     b	3,3b	46,0  b	25,4  b
T3: BC (1;2;3;4; y 5)	0b	13,45   b	3,2b	40,7  b	19,4  b
* Fungicidas / épocas  de aplicación de precosecha : V= Vinclozolin; B=Benomyl; C=Captan;I = Iprodione; T=Trichodex ; y  BC= BC-1000.    /////   1= preflor; 2= plena flor; 3= fruto formado; 4= pinta, y  5= precosecha.
**A: Tratamiento tradicional de SO2(Gasificación y Generador), y B: Sin control.

2.2 Residualidad de Trichodex 25% WP

En estudios efectuados para determinar la residualidad del producto aplicado en vides cv. Thompson Seedless, bajo condiciones de campo, se pudo establecer que después del septimo día post aplicación el nivel de control otorgado por el fungicida biológico tendía a disminuir, (Figura 1), y que el mayor efecto lo producía entre el tercer y quinto día post aplicación.

Figura  1. Residualidad de Trichoex 25% WP en bayas cv Thompson seedles. Efecto evaluado previo y posterior a la aplicación del fungicida biológico (0, 72, 96, 168 y 264 horas post producto), versus Testigo sin aplicación. Barras señalan nivel de infección promedio en bayas colectadas en cada uno de los tiempos y mantenidas en incubación a 20ºC en placas de  Petri conteniendo Agar-Agua. (3 repeticiones, 25 bayas por repetición).

En Otros ensayos se pudo comprobar que el efecto de Trichodex era mayor cuando se consideraba su aplicación en la época de floración que en Pinta (véraison), y cuando este se incorporaba con 72 horas de antelación a una condición de infección dada (Figura 2). Aplicaciones de Trichodex efectuadas más cercanas a una infección potencial (inoculación artificial), o posterior a esta no otorgaban el efecto deseado.  En la época de Pinta, la situación observada era diferente, no se detectaba una tendencia con respecto a momento más oportuno de aplicación, obteniéndose más bien respuestas erráticas en el control de la enfermedad (Figura 3).

Figura 2.  Efecto de Trichodex sobre B. cinerea en cv. Thompson Seedless evaluado en postcosecha luego de 21 días a 0ºC y 2 días a temperatura ambiente (15-18ºC), al ser aplicado durante la época de Floración: 72 horas (T1), 48 horas (T2), 24 horas (T3) previo a condición de infección (inoculación de botritis),  y  con desfase de 1 hora (T4), y 24 horas post inoculación (T5),  versus condición de tratamiento de inoculación (T6) y de testigo (condición de inóculo natural del parronal) (T7).

Figura 3.  Efecto de Trichodex sobre B. cinerea en cv. Thompson Seedless evaluado en postcosecha luego de 21 días a 0º C y 2 días a temperatura ambiente (15-18ºC), al ser aplicado durante la época de Pinta (véraison): 72 horas (T1), 48 horas (T2), 24 horas (T3) previo a condición de infección (inoculación de botritis),  y  con desfase de 1 hora (T4), y 24 horas post inoculación (T5),  versus condición de tratamiento de inoculación (T6) y de testigo (condición de inóculo natural del parronal) (T7).

2.3 Compatibilidad de Trichodex 25% WP con otros fungicidas

Dado que en un programa fitosanitario normal de uva de mesa se requiere  la utilización de una variedad de fungicidas para el control de las principales patologías que afectan  a la vid (botritis y oídio), y estos podrían afectar la viabilidad de los propágulos de éste controlador biológico (MTR₃₉) disminuyendo su efectividad, y como no se disponía de antecedentes previos en la literatura respecto del comportamiento de compatibilidad de trichoderma con otros fungicidas, era de suma importancia determinar el efecto de estos sobre MTR₃₉.

Los fungicidas evaluados en las pruebas de compatibilidad in vitro como in vivo fueron los siguientes: Benomyl, Captan, DF-100, Folpet; Iprodione; Pyrimethanil; y Azufre mojable, Azufre malla 325 y Triadimefon como productos de acción oídicida. 

El efecto de compatibilidad se determinó en forma in vitro sobre la germinación conidial y crecimiento miceliar del aislado de trichoderma, e in vivo en campo, al ser aplicado el controlador biológico sobre bayas del cv Thompson Seedless antes y después de ser sometidas las bayas a aplicaciones con los distintos fungicidas. 

En general tanto en los ensayos de compatibilidad in vitro como in vivo los resultados obtenidos señalan que los fungicidas de acción oídicida (Azufres en sus dos formulaciones y Triadimefon) eran inocuos para trichoderma, afectando muy levemente el desarrollo del controlador biológico. (Figura 4).

Figura 4.  Efecto de distintos fungicidas de acción Botriticida y Oídicida sobre el crecimiento miceliar de Trichoderma harzianum aislado T₃₉ (Trichodex 25%WP). Resultados se expresan en porcentaje sobre un control puro (Trichoderma solo), y señalan el nivel de inhibición promedio presentado por cada fungicida a las distintas concentraciones evaluadas (ingredientes activos) sobre el micelio del antagonista biológico.

En los fungicidas de acción botriticida se pudieron apreciar ciertas diferencias; algunos de estos presentaban una inhibición mayor sobre la germinación conidial que sobre el crecimiento miceliar y otros a la inversa. Entre los fungicidas que resultaron ser más compatibles con la germinación conidial de trichoderma destaca Iprodione, que incluso resulta ser más compatible que los productos oídicidas (menor efecto sobre la germinación de conidias). Sin embargo al ser evaluado sobre el crecimiento miceliar este fungicida (Iprodione), presentó una menor compatibilidad con el controlador biológico.  En general en el estudio in vitro se pudo comprobar  que todos los fungicidas de acción botriticida evaluados afectaban el crecimiento de trichoderma, destacando como el de menor compatibilidad Benomyl (Figura 5 y 4).

Figura 5.  Efecto de distintos fungicidas de acción Botriticida y Oídicida sobre germinación conidial de Trichoderma harzianum aislado T₃₉ (Trichodex 25%WP). Resultados se expresan en porcentaje sobre un control puro (solo  Trichoderma), y señalan el nivel de inhibición promedio presentado por cada fungicida a las distintas concentraciones evaluadas (ingredientes activos) sobre el nivel de germinación conidial (%), del antagonista biológico.

En orden  decreciente  de mayor a menor  Grado de compatibilidad  in vivo se evidenciaron dos grupos. El primero de estos con una mayor compatibilidad conformado por Azufre en sus dos formulaciones, Triadimefon  e Iprodione, y un segundo grupo de menor compatibilidad compuesto por Pyrimethanil, DF-100, Benomyl, Folpet y Captan.

Además se determinó que   Iprodione y Pyrimethanil  presentaron una mayor compatibilidad al ser aplicados antes (menor efecto sobre la germinación de las conidias), y que  DF-100, Captan y Folpet eran más compatibles al ser aplicados después del controlador biológico. (Mayor efecto sobre germinación).

3. Literatura consultada

Abbott laboratories de Chile LTDA. 1997. “Trichodex 25% WP: La Alternativa Biológica”. P 82 –88. In : Botrytis: Nuevas estrategias de control cultural, Biológico y químico en uva de mesa”. M. Esterio y J. Auger Ed. Universidad de Chile. Fac. de Ciencias Agrarias y Forestales, Depto. de Sanidad Vegetal. 125 p.

Alvarez, E. 1998. Evaluación del efecto de los fungicidas utilizados en el programa fitosanitario de Vitis vinifera L.  cv Thompson Seedless en el control biológico de Botrytis cinerea por Trichoderma harzianum Rifai capa T₃₉ (Trichodex 25% WP). Memoria de Título Ing. Agr. Fac. de Cs. Agronómicas Universidad de Chile. 105 p.

Elad, Y., Chet, Y. and Henis, Y. 1982. Degradation of plant pathogenic fungi by Trichoderma harzianum. Canadian Journal of Microbiology 28: 719 –725.

Esterio M. y J. Auger. 1997. Control de Botrytis cinerea Pers. en vid ( Vitis vinifera L. ) utilizando fungicidas no convencionales: BC-1000 y Trichodex. Rev. Aconex 54: 11-17.

Esterio, M.; Auger, J.; Alvarez, E.; Caro, V.; Maturana G. y  Arroyo, A.“ 1997. Compatibilidad de Trichodex 25% WP( Trichoderma harzianum Rifai), con nueve fungicidas comunmente utilizados en programas de manejo fitosanitario en vides (Vitis vinifera L.) en Chile por medio de estudios in vitro” Resúmenes de VII Congreso Chileno  de Fitopatología.  La Serena, 25 – 27 de noviembre de 1997 pág. 19.

Esterio, M.; Auger, J.; Alvarez, E.; Droguett, A.; Caro, V y Maturana G. 1997. “Efecto de fungicidas de uso habitual en Chile en uva de mesa (Vitis vinifera L.) sobre Trichoderma Harzianum Rifai (Trichodex 25% WP) a través de ensayos de campo y laboratorio( estudio in vivo)”. Resúmenes de VII Congreso Chileno  de Fitopatología.  La Serena, 25 – 27 de noviembre de 1997 pág. 20.

Esterio, M.; Auger, J.; Medel, L. y Droguett, A. 1998. “Control integrado de Botrytis cinerea Pers. en uva de mesa (Vitis vinifera L.), mediante Trichoderma harzianum Rifai cepa T₃₉ ( TRICHODEX 25% WP); Pyrimethanil y el uso del aire forzado”. Resúmenes IX CONGRESO LATINOAMERICANO DE HORTICULTURA – XLIX CONGRESO AGRONÓMICO DE CHILE. Santiago, 30 de Noviembre al 3 de Diciembre de 1998. Nº 95.

Makhteshim. Agan. 1992. T-39 Against Botrytis. Koor Chemicals Group Agrochemicals. Israel. 37p.